Приложение Л (обязательное)

Приготовление питательных сред для культивирования и учёта количества бифидобактерий

Для культивирования и учёта бифидобактерий используют кукурузно-лактозную и гидролизатно-молочную среды.

1 Приготовление кукурузно-лактозной среды

В небольшом количестве дистиллированной воды расплавляют агар (2,5 ± 0,5 г на 1 дм³ приготовляемой среды). К остальному количеству дистиллированной воды добавляют 10 ± 1 г пептона, 40 ± 1 см водного раствора кукурузного экстракта, разбавленного 1:6, 6 ± 0,5 г натрия лимоннокислого трёхзамещённого, 0,12 ± 0,02 г магния сернокислого, 2 ± 0,1 г калия фосфорнокислого однозамещённого, 1,0 ± 0,1 г натрия фосфорнокислого двухзамещённого, смесь нагревают до температуры 80 ± 2⁰С, после чего соединяют с расплавленным агаром, добавляют 10 ± 0,5 г лактозы и 0,15 ± 0,05 г цистина солянокислого или 0,5 ± 0,1 г кислоты аскорбиновой.

Цистин растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, в которой предварительно устанавливают активную кислотность среды 8,5 ± 0,5 с помощью 10% раствора NaOH, и нагревают на водяной бане до полного растворения цистина.

Смесь доливают горячей дистиллированной водой до заданного объёма и устанавливают активную кислотность среды 7,1 ± 0,2 ед. рН с помощью 40% раствора NaOH или 25% раствора аммиака. Среду разливают в пробирки высоким столбиком по 10 ± 0,5 см и стерилизуют при температуре 112 ± 1⁰С в течение 30 ± 2 мин.

Среду проверяют на стерильность путём выдержки при температуре 37 ± 1⁰С в течение 2 суток.

Хранят среду не более месяца при температуре 20 ± 2⁰С и не более 2 месяцев при температуре 6 ± 2⁰С.